Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者令人满意缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到呼吸道免疫球蛋白到用到1型号哮喘医学病症的的发展率在孩童时期就有很好的阐述，多个呼吸道免疫球蛋白无病症的孩童中都有70%在血浆类比后10年内患上哮喘，而随访15年的孩童这一百分比增大到84%。来得之下，分之二医学1型号哮喘一半以上的型号1型号哮喘的病症机制还不会得不到充分的研究者。

越来越多的人开始采用再行系统来定义1型号哮喘的的发展：个纤在用到多种呼吸道免疫球蛋白时进到第1之前，用到血糖异常时进到第2之前，用到病症时进到第3之前。一些多发呼吸道免疫球蛋白无病症的个纤，在1期和2期，的发展较迟，并发展为病症的1型号哮喘。我们之前阐述了一组成员在首次探测到多种呼吸道免疫球蛋白样品后大概10年无哮喘的正因如此迟的发展者，这组成员患儿伤亡人数正因如此多，但外观上并不确切。随后，我们发现呼吸道自身抗原基因表达CD8+T肝细胞加成在的发展正因如此快的患儿中都大纤不发挥作用，但在近期病症和长期发挥作用的哮喘患儿中都很容易探测到。这可能表明，与的发展患儿来得，这些患儿免疫加成的调控减弱。

早期研究者表明，尽管调控性T肝细胞(Treg)百分比正常，但哮喘患儿发挥作用一些机能缺陷，其中都包括对IL-2的加成能力也增大。此外，哮喘患儿中都的现象CD4+T肝细胞可能对调控不具抵抗性，表现为现象T肝细胞的可抑制消散，自然造成的Treg和灌注造成的抑制Treg，以及抗原境遇的CD4+T肝细胞中都IL-2加成消散。本研究者的借以是阐述了CD4+调控性T肝细胞(Treg)在一小群正因如此正因如此快的发展者中都的外观上，他们的平均年纪为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以人群为基础的横向研究者，在21岁此表出院的患儿直系亲属中都检查1型号哮喘的脆弱环境因素。我们之前阐述了长期正因如此快的发展者的外观上，他们保持多重呼吸道免疫球蛋白无病症超过10年，但不会用到哮喘的医学病症，迟性或非顺利进行性免疫。随后，10名再次保持无哮喘并愿意提供大量血液样品的正因如此快的发展者纳入T和B肝细胞机能分析。在目前的研究者中都，8名迟的发展者(SP组成员)，中都位年纪43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的呼吸道免疫球蛋白无病症。所有的与会者都受制于1型号哮喘的发展的1期，尽管一些人随后保住了呼吸道免疫球蛋白对某些抗原的无病症加成，然而，一名患儿已经受制于2期大概6年，但不会用到医学病症，一名患儿被病人为哮喘，该病患72岁，在采集实验样品时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中都对该NADP顺利进行了单独评量。复合外周血单个核肝细胞(PBMCs)，引入多参数流式肝细胞心法和T肝细胞可抑制试验评量NADP中都Treg的增益、基因表达号和机能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类比对、无关联和回归)顺利进行无监督聚类分析，评量Treg基因表达号。

结果：与卫生NADP来得，来自迟的发展纤的无意识CD4+T肝细胞的监督聚类辨识，转录的无意识CD4+ Treg增益增大，与抑制作用抑制的TNFR无关蛋白(GITR)解读增大有关。一名HbA1c升高的患儿与的发展正因如此快者和归一化的来得较组成员来得，Treg曲谱有所不同。机能最近，与卫生NADP来得，来自正因如此快的发展纤的Treg内源性的CD4+现象T肝细胞可抑制明显毁坏。表现为对现象CD4+T肝细胞CD25和CD134解读的可抑制增大。

绘出1 深入的基因表达号分析辨识，CD4+Treg亚型号在迟的发展配置文件中都增大。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有NADP的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据上面物解读比对出10个元簇:无意识T肝细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)采用9个不同Treg上面降解的10个元簇的MST。每个节点代表一个一个大(100个一个大)，更为大的元一个大(10个元一个大)在节点组成员周围上色。每个节点中都的碗绘出对此单个上面的解读级别。(b)每个元聚类的热绘出，以辨识整纤上面解读。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)降解绘出，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖物。(e-l)相对核素为每个metacluster罐该线绘出(核素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T肝细胞(l)。橙色左上角代表慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一小写字母秩化验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 采用CITRUS的相吻合号证实，Treg增益的增大是的发展正因如此快的标志。分级门控(a - f)和玉米分析(g-k)比起SP与会者和归一化的HD与会者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的歧异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族群的代表性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利进行复合，虚拟FlowSOM族群。(b) HD(黑点)和SP(布氏)组成员以及NADPSP 606(橙色)中都CD25+ cd127的增益统计绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控同构的罐该线绘出;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)甜菜簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读高强度着色，箭头明显的簇被标记为SP和HD配置文件之间的不同。(j)罐该线绘出辨识了在SP(布氏)和HD(灰点)组成员中都，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对核素(百分比)。(k)直方绘出辨识每个簇的基因表达号(紫色)和Treg上面相对解读与取材解读(蓝色);上列，寄存器Treg_3;示意图悄悄，寄存器Treg_4。取材与所有其他簇中都上面的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一小写字母秩化验

绘出3 与卫生献血者来得，的发展正因如此快者无意识treg的GITR增大。每个无意识CD4+T肝细胞元簇(无意识T肝细胞_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T肝细胞;HLA-DR + GITR +无意识T肝细胞;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个解读上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的解读热绘出(sp606不包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR解读串联，辨识直方绘出(c)和统计绘出(d)。Wilcoxon一对一小写字母秩和化验，p< 0.07(橙色)所有NADP包括，p< 0.05(蓝色)NADPSP 606和归一化的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR解读，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(橙色)串联，辨识直方绘出(e)和统计绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一小写字母秩化验

绘出4 来自正因如此快的发展的CD4+ treg肝细胞控制现象CD4+T肝细胞的能力也增大。SP组成员用蓝色的该线和左上角对此，HD组成员用紫色的该线和左上角对此，橙色的该线/左上角对此NADPsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上面为CFSE, Treg按观察的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠增殖肝细胞，培育3紧接著顺利进行流式肝细胞心法探测。(a-d)与CD4+这样的话者相对应的treg培育(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培育。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE可抑制倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制倍数。采用无病症来得较(转录的拥护肝细胞不含treg)测算可抑制倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

绘出5 现象CD4+T肝细胞对正因如此快的发展的T肝细胞增殖的可抑制更为敏感。SP组成员用蓝色的该线和左上角对此，HD组成员用紫色的该线和左上角对此，橙色的该线/左上角对此NADPsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞顺利进行分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上面，treg按观察的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠增殖肝细胞，培育3紧接著顺利进行流式肝细胞心法(CD25反染)和肝趋化因三子分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者联合培育。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE可抑制花红(b)。(c,d) CD25可抑制花红(c)和CD134可抑制花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中都的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

结论：我们得出的结论是，来自正因如此快的发展三子的增殖无意识CD4+Treg在GITR解读中都得不到了扩大和丰富，特别强调了全面研究者Treg在1型号哮喘后果个纤中都的异质性的实质。

译文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28